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ATCC細胞的具體計數(shù)操作教學

發(fā)布時間: 2021-06-17  點擊次數(shù): 1002次
   當待測ATCC細胞懸液中細胞均勻分布時,通過測定一定體積懸液中的細胞的數(shù)目,即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數(shù)目。
  具體計數(shù)的操作如下:
  1.將計數(shù)板及蓋片擦拭干凈,并將蓋片蓋在計數(shù)板。
  2.將ATCC細胞懸液吸出少許,滴加在蓋片邊緣,使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間,靜置3min,注意蓋片下不要有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中。
  3.計算板四大格細胞總數(shù),壓線細胞只計左側和上方的。然后按公式計算:
  細胞數(shù)/mL=四大格細胞總數(shù)/4×104。
  說明:公式中除以4,因為計數(shù)了4個大格的細胞數(shù)。公式中乘以104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:
  1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm³,而1ml=1000mm³。
  注意:鏡下偶見有兩個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算,若細胞團10%以上,說明分散不好,需重新制備細胞懸液。
  ATCC細胞計數(shù)要點:
  1.進行細胞計數(shù)時,要求懸液中細胞數(shù)目不低于1×107 L-1,如果細胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。
  2.要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數(shù)準確性。
  3.取樣計數(shù)前,應充分混勻細胞懸液,尤其時多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混勻,以求計數(shù)準確。
  4.數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照1個細胞計算。如果細胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計右線,不計左線。
  5.操作時,注意蓋片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數(shù)。

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